H4nn1站友在去年有个问题：
各位老师， 我们在做一个项目，想把PBMC中表达靶点的细胞给分选出来，然后看我们自己的抗体能不能有药效。
现在有一个问题是如果用靶点抗体分选，分选后的已经有抗体结合在细胞上，可能有竞争，我们自己的抗体就上不去了，所以请问有好的方法去除分选后细胞上的荧光抗体吗？
各位老师， 我们在做一个项目，想把PBMC中表达靶点的细胞给分选出来，然后看我们自己的抗体能不能有药效。
现在有一个问题是如果用靶点抗体分选，分选后的已经有抗体结合在细胞上，可能有竞争，我们自己的抗体就上不去了，所以请问有好的方法去除分选后细胞上的荧光抗体吗？
我对此没什么经验，搜索后回答道：
在谷歌上还找到另一个解决方案，感觉可能有一定作用，翻译供参考：
FACS 分选后，将收集的细胞与 10 ml 完整细胞培养基在 37℃ 下孵育 10-15 分钟，轻轻摇动并离心。再次用 10 ml 完全细胞培养基溶解沉淀并在 37°C 下孵育 10-15 分钟，轻轻摇动并离心。如此重复此步骤五次。
通过上述每个洗涤步骤，每次都能去掉部分抗体，唯一的缺点是可能也会丢掉一些细胞。
注意：不要忘记将培养基预热到 37 度 。
在谷歌上还找到另一个解决方案，感觉可能有一定作用，翻译供参考：
FACS 分选后，将收集的细胞与 10 ml 完整细胞培养基在 37℃ 下孵育 10-15 分钟，轻轻摇动并离心。再次用 10 ml 完全细胞培养基溶解沉淀并在 37°C 下孵育 10-15 分钟，轻轻摇动并离心。如此重复此步骤五次。
通过上述每个洗涤步骤，每次都能去掉部分抗体，唯一的缺点是可能也会丢掉一些细胞。
注意：不要忘记将培养基预热到 37 度 。
然而，H4nn1站友反馈道：
倪老师，这个方法我们尝试过了 并不可行，我们重复了5次洗的步骤也没有任何区别
倪老师，这个方法我们尝试过了 并不可行，我们重复了5次洗的步骤也没有任何区别
很遗憾，没有特别好的解决方法，昨天又有站友在此帖子留言问方法找到了吗？
对于没有解决的问题，心里甚是焦急，再次打开搜索引擎，发现Nature Method在2002年有一篇解离MHC多聚体的文章，里面提到的方法对MHC多聚体的洗脱很有效，但不知道对常规抗体是否有效，仅作分享，希望有条件的FLOWER能确认后反馈：
d-biotin是B族维生素生物素的天然存在的生物活性形式，参与脂质、蛋白质和碳水化合物的代谢。Knabel 等人通过d-biotin逆转MHC多聚体各个单体Fab与主链的结合，从而破坏多聚体，恢复单体状态，并进一步使其与细胞解离，条件是4℃，d-biotin的浓度是1mM，时间4小时（从解离的效果看1~4小时相差不大）。
参考文献：Knabel M, Franz TJ, Schiemann M, et al. Reversible MHC multimer staining for functional isolation of T-cell populations and effective adoptive transfer. Nat Med. 2002;8(6):631-637. doi:10.1038/nm0602-631
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d-biotin是B族维生素生物素的天然存在的生物活性形式，参与脂质、蛋白质和碳水化合物的代谢。Knabel 等人通过d-biotin逆转MHC多聚体各个单体Fab与主链的结合，从而破坏多聚体，恢复单体状态，并进一步使其与细胞解离，条件是4℃，d-biotin的浓度是1mM，时间4小时（从解离的效果看1~4小时相差不大）。
参考文献：Knabel M, Franz TJ, Schiemann M, et al. Reversible MHC multimer staining for functional isolation of T-cell populations and effective adoptive transfer. Nat Med. 2002;8(6):631-637. doi:10.1038/nm0602-631
此外，我记得美天旎有个商品化试剂盒REALease，但不知道是否必须要搭配REAfinity抗体。
如果哪位FLOWER有更好的洗脱分选后细胞表面抗体的方法，欢迎留言分享，或到原帖跟帖分享！流式因你而精彩！
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